神經(jīng)性貝類毒素抗原

免疫分析法是基于抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應(yīng)而建立起來的一種生物化學(xué)分析法，即根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)，采用特異性抗體來檢測藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等物質(zhì)的定量分析方法。免疫分析法主要包括酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫法、熒光免疫法等，具有方便、快速的特點，但也存在一定的缺點，如費用較高、毒素之間的交叉反應(yīng)難避免、實驗結(jié)果重現(xiàn)性較差等。

ELISA是檢測海洋生物毒素所采用的主要免疫方法。該技術(shù)可用目測，也可用酶標(biāo)儀測定光密度值，具有易定性定量的優(yōu)點^[6]。Tsao等^[7]采用單克隆抗體ELISA檢測法檢測ASP中的軟骨藻酸(domoic acid, DA)，并建立了基于單克隆抗體的膠體金免疫條檢測法；該方法的檢測限為5 ng/mL，在10 min內(nèi)就可完成測定，提示免疫條檢測可用來快速檢測貝類樣品中的DA。也有研究者建立了基于基因工程單鏈抗體競爭ELISA檢測方法，該方法最大的優(yōu)勢是毒素可在大腸桿菌中快速、大量得到表達，且容易和其他小分子融合，形成融合蛋白以用于檢測或其他用途；對該方法進行驗證發(fā)現(xiàn)，其與標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography, HPLC)檢測結(jié)果有較好的相關(guān)性^[8]。李軍濤等^[9]建立DSP免疫熒光層析試紙條檢測方法，靈敏度可達0.125 μg/mL，達到我國貝類產(chǎn)品中DSP所允許的*。Dubois等^[10]建立了間接競爭ELISA方法檢測STX，該方法用毒素的偶聯(lián)物免疫產(chǎn)生的抗體來檢測貽貝、牡蠣和扇貝中的STX類毒素；在檢測之前，用90%的乙醇溶液將STX類毒素從貝類組織里快速提取出來，該方法的*檢測限為5 μg/kg。Garthwaite等^[11]也建立了4類貝毒的ELISA方法，均可滿足貝類提取物中樣品的鑒定，且樣品回收率較高。TTX為氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的神經(jīng)毒素之一^[12]。Thattiyaphong等^[13]建立了一種側(cè)流免疫層析技術(shù)來實現(xiàn)TTX的快速檢測，并運用該方法檢測了河鲀及食用魚中TTX的含量；與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)相比，該方法的靈敏度為94.0%，特異性為92.4%。總的來說，側(cè)流免疫層析技術(shù)可用于大批量樣本的篩選，陽性結(jié)果的樣本再使用LC-MS/MS進行確認(rèn)，減少了LC-MS/MS的測試量，降低了檢測成本。Reverte等^[14]開發(fā)了一種基于雙硫醇自組裝單分子膜的新ELISA方法，該方法可用于檢測河鲀中TTX的含量，檢測限為0.23 mg/kg，其與LC-MS/MS法的相關(guān)性為0.991。

大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)是DSP中的主要成分，屬于聚醚類海洋生物毒素，尚無致死病例，但長期攝入可以致畸及致